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蛋白印迹实验(Western blot)
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设备简介
  • 低温寄送Tip
  • 如果您的样品需要低温寄送,4℃左右可用冰袋寄送,-20℃和-80℃请干冰寄送。
  • 如果需要我们为您提供干冰,干冰寄送时间需要1-2天,请提前联系我们的技术顾问。
  • 如果有任何疑问,可联系光衍未来项目经理。
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  • 1. 预约前需要您确认的信息:
  • (1)明确样品中是否存在检测的目的蛋白?并且在哪个时期存在?是否需要外源性刺激其表达?(这些问题决定了前处理的方法和时间)
  • (2)目的蛋白的是否容易出现降解?分子量大小?是否存在于细胞或组织特定部位需要特殊方法提取?(这些问题涉及目的蛋白提取方案及是否可以寄送)
  • (3)目的蛋白含量是否达到wb的检测限?(目前认为Western Blot的有效检测下限为0.1-1ng,含量高有助于条带显影)。
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  • 样品要求
  • 一、需要提供
  • 1. 待测样品(材料或者样品处理后的细胞/蛋白,也可由我们代处理);
  • 2. 提供待测样品的一抗及其说明书(一抗一般为10ul左右,也可由平台代购);
  • 3. 其他所涉及的细胞、试剂盒以及生物耗材等平台都可以有偿提供。
  • 二、送样须知
  • 1.  细胞样品:细胞量1-2*107个,需要用PBS 清洗后,离心收集细胞沉淀,不能残留PBS,封口膜封口,标记,放入-80°C 冰箱保存,干冰运输寄送。
  • 2. 组织样品:200mg以上组织,取样品后尽量快速操作,放入液氮中速冻或者立刻存入-80°C 冰箱,样品不能反复冻融,干冰运输寄送。
  • 3. 蛋白样品:未变性的蛋白需要存入-80°C ,干冰运输寄送;Loading Buffer煮沸的蛋白,需要提供蛋白浓度(浓度需在5μg/μl 以上,200μl样品),冰袋运输寄送。
  • 4.  植物组织样品:选取新鲜组织,200mg以上组织,尽量避免衰老,病变,发霉的组织;将样品剪成小块放入液氮预冷的螺口离心管中,在液氮中速冻5min,-80度保存,干冰运输寄送。
  • 5. 血液样品: 样品无潜在性携带病原体和病毒。如果存在病毒的可能性,请灭活处理;
  • (1)全血:采集新鲜血液,建议全血样品用全血样品RNA提取试剂盒抽提RNA,或者新鲜血液分离白细胞;处理后的样本放入干冰或者﹣80℃冰箱保存,干冰运输寄送。
  • (2)血浆:用EDTA等抗凝剂处理后的样本,4℃ 4000rpm离心5分钟,上层为血浆样本,按每200µl血浆样本加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol,涡旋摇匀,放入干冰或者-80℃冰箱保存,干冰运输寄送。
  • (3)血清:用非抗凝管收集血样,静置分离上层血清,按每200uL血清加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol,涡旋摇匀,放入干冰或者-80℃冰箱保存,干冰运输寄送。
  • 6. 菌体:收集菌体到1.5ml的离心管内,离心去上清,用1*pbs洗涤三次,液氮速冻5min后,-80度保存。
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