流式细胞仪你选对了吗，主要功能有哪些？
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发布于：2023-07-05
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- 流式细胞技术是一种用于分析细胞的具有多种应用的技术，包括细胞计数、表型分析、细胞周期评估和生存力检测等不同应用。流式细胞仪中激光产生的光被样品中的细胞散射，由检测器测量，然后转换为可以分析和测量的信号。
- 流式细胞仪（Flow cytometer ）是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标，而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说，它的细节 分辨率为零。
- 它集光学、电子学、流体力学、细胞化学、生物学、免疫学以及激光和计算机等多门学科和技术于一体， 同时具有分析和分选细胞功能，对细胞悬液进行快速分析，通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标。
- 它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状，还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等，可对群体细胞在单细胞水平进行分析， 在短时间内检测分析大量细胞，并收集、储存和处理数据，进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞，分选纯度>95%。
- 流式细胞仪的主要用途：
- 1、分析细胞表面标志。细胞表面的功能很复杂，是近年来分子细胞生物学研究的新领域，细胞表面标志与免疫、癌变等都有着十分密切的关系。流式细胞仪的发明可以很好进行细胞表面标志的分析，起到非常重要的作用。
- 2、分析细胞内抗原物质。抗原是能刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并与这些产物发生特异性反应的物质。通过流式细胞仪对于细胞内的抗原物质进行分析可以很好地了解机体的免疫功能等。
- 3、分析细胞受体。细胞受体主要是同脂溶性的小信号分子相作用，流式细胞仪通过对细胞受体的分析可以帮助调节更多的基因表达。
- 4、分析肿瘤细胞的DNA、RNA含量。流式细胞仪通过对肿瘤细胞的DNA、RNA分析，可以判断出病变程度，对于诊断和治疗是非常有利的。
- 5、分析免疫细胞的功能。免疫细胞俗称白细胞，包括淋巴细胞、吞噬细胞等，流式细胞仪通过对于人体内的免疫细胞进行功能的分析，可以更好地判断出各类细胞的功能，这对于帮助人体建立良好的免疫系统非常有帮助。
- 流式细胞仪除了以上的主要用途之外，还被用于进行液体的活检，包括ddPCR、NGS、CTC、还有ctDNA等。
- 流式细胞仪的工作原理是：将待测细胞经特异性荧光染料染色后放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。
- 流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。
- 这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。
- 这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。
- 计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，也可以打印出来，还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。
- 检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。单参数数据以直方图的形式表达，其X轴为测量强度，Y轴为细胞数目。
- 一般来说，流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数，这视其模数转换器的分辨率而定。对于双参数或多参数数据，既可以单独显示每个参数的直方图，也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。
- 细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。在流动室的喷口上配有一个超高频电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测定细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷，当液滴流经带有几千伏特的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，不予充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。对分选出的细胞可以进行培养或其它处理，做更深的研究。
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