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可见分光光度计
可见分光光度计
广泛应用于食品、药品、电力、生物研究、教学科研、化学化工、质量监督、水质环保和商检等各大领域。可广泛应用于工厂、学校、冶金、农业、食品、生化、环保、石油化工、医疗卫生等单位的基础实验室。
可见分光光度计采用了光学系统设计和电路控制系统
,
设计十分严谨
,
元器件的选用控制严格
,
具有高标准的准确度、重复性、低噪声和低杂散光指标;
分光光度法的使用始于牛顿
(Newton)
。早在
1665
年牛顿做了一个惊人的实验
:
他让太阳光透过暗室窗上的小圆孔,在室内形成很细的太阳光束,该光束经棱镜色散后,在墙壁上呈现红、橙黄、绿、蓝、靛、紫的色带这色带就称为
“
光谱
”
。牛顿通过这个实验,揭示了太阳光是复合光的事实。
常见分光光度计分类及其用途
(1)
可见分光光度计
用来测量待测物质对可见光
(400
~
760nm)
的吸光度并进行定量分析的仪器,称为可见分光光度计。可在
600nm
测定细菌细胞密度。
(2)
紫外可见分光光度计
紫外可见光谱仪用来测量待测物质对可见光或紫外光
(200
~
760nm)
的吸光度并进行定量分析的仪器。可以测定核酸和蛋白的浓度,也可以测定细菌细胞密度,紫外分光光度计又可分为单光束
,
假双光束
,
双光束。
(3)
红外分光光度计
一般的红外光谱是指大于
760nm
的红外光谱,这是研究有机化合物最常用的光谱区域,能分析各种状态
(
气、液、固
)
的试样,红外光谱法的特点是:快速、样品量少
(
几微克~几毫克
)
,特征性强
(
各种物质有其特定的红外光谱图
)
、能分析各种状态
(
气、液、固
)
的试样以及不破坏样品。
(4)
荧光分光光度计
荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器,应用于科研、化工、医药、生化、环保以及临床检验、食品检验、教学实验等领域,通过对这些参数的测定
,
不但可以做一般的定量分析
,
而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化
,
从而阐明分子结构与功能之间的关系。
(5)
原子吸收分光光度计
主要适用样品中微量及痕量组分分析常规仪器之一,是材料分析及质量控制部门进行常量、微量金属
(
半金属
)
元素分析的有力工具。
使用分光光度计的步骤与方法
(
1
)预热仪器:
为使测定稳定,将电源开关打开,使仪器预热
20min
,为了防止光电管疲劳,不要连续光照。预热仪器时和在不测定时应将比色皿暗箱盖打开,使光路切断。
(
2
)选定波长:
根据实验要求,转动波长调节器,使指针指示所需要的单色光波长。
(
3
)固定灵敏度档:
根据有色溶液对光的吸收情况,为使吸光度读数为
0.2
~
0.7
,选择合适的灵敏度。为此,旋动灵敏度档,使其固定于某一档,在实验过程中不再变动。一般测量固定在
“1”
档。
(
4
)调节
“0”
点:
轻轻旋动调
“
0
”
电位器,使读数表头指针恰好位于透光度为
“0”
处(此时,比色皿暗箱盖是打开的,光路被切断,光电管不受光照)。
(
5
)调节
T=100%
:
将盛蒸馏水
(
或空白溶液或纯溶剂
)
的比色皿放入比色皿座架中的第一格内,有色溶液放在其它格内,把比色皿暗箱盖子轻轻盖上,转动光量调节器,使透光度
T=100%
,即,表头指针恰好指在
T=100%
处。
(
6
)测定:
轻轻拉动比色皿座架拉杆,使有色溶液进入光路,此时表头指针所示为该有色溶液的吸光度
A
,读数后,打开比色皿暗箱盖。
(
7
)关机:
实验完毕,切断电源,将比色皿取出洗净,并将比色皿座架及暗箱用软纸擦净。
可见分光光度计(二)(使用注意事项、故障和解决方法)
分光光度计使用注意事项
(1)
分光光度计应放在干燥的房间内,使用时放置在坚固平稳的工作台上,室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风,防止灯泡灯丝发亮不稳定。
(2)
分光光度计使用前,使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理,以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前,应该对仪器的安全性能进行检查,电源接线应牢固,通电也要良好,各个调节旋钮的起始位置应该正确,然后再按通电源开关。
(3)
分光光度计在仪器尚未接通电源时,电表指针必须于
“0”
刻线上,若不是这种情况,则可以用电表上的校正螺丝进行调节。
(4)
若大幅度改变测试波长,需稍等片刻,等灯热平衡后,重新校正
“0”
和
“100%”
点。然后再测量。
(5)
指针式仪器在未接通电源时,电表的指针必须位于零刻度上。若不是这种情况,需进行机械调零。
(6)
比色皿使用完毕后,请立即用蒸馏水冲洗干净,并用干净柔软的纱布将水迹擦去,以防止表面光洁度被破坏,影响比色皿的透光率。
(7)
操作人员不应轻易动灯泡及反光镜灯,以免影响光效率。
(8)WFZ800-DA
、
756
型等分光光度计,由于其光电接收装置为光电倍增管,它本身的特点是放大倍数大,因而可以用于检测微弱光电信号,而不能用来检测强光。否则容易产生信号漂移,灵敏度下降。针对其上述特点,在维修、使用此类仪器时应注意不让光电倍增管长时间暴露于光下,因此在预热时,应打开比色皿盖或使用挡光杆,避免长时间照射使其性能漂移而导致工作不稳。
(9)
放大器灵敏度换挡后,必须重新调零。
(10)
比色杯的配套性问题。比色杯必须配套使用,否则将使测试结果失去意义。在进行每次测试前均应进行比较。
具体方法如下:分别向被测的两只杯子里注入同样的溶液,把仪器置于某一波长处,石英比色杯;
220nm
、
700nm
装蒸馏水,玻璃比色杯:
700nm
处装蒸馏水,将某一个池的透射比值调至
100%
,测量其他各池的透射比值,记录其示值之差及通光方向,如透射比之差在
±0.5%
的范围内则可以配套使用,若超出此范围应考虑其对测试结果的影响。
故障及解决方法
1
、仪器不能调零。可能原因:
a.
光门不能完全关闭。解决方法:修复光门部件,使其完全关闭。
b.
透过率
“100%”
旋到底了。解决方法:重新调整
“100%”
旋钮。
c.
仪器严重受潮。解决方法:可打开光电管暗盒,用电吹风吹上一会儿使其干燥,并更换干燥剂。
d.
电路故障。解决方法:检修电路。
2
、仪器不能调
“100%”
,可能原因:
a.
光能量不够。解决方法:增加灵敏度倍率档位,或更换光源灯(尽管灯还亮)。
b.
比色皿架未落位。解决方法:调整比色皿架使其落位。
c.
光电转换部分老化。解决方法:更换部件。
d.
电路故障。解决方法:调修电路。
3
、测量过程中
,“100%”
点经常变动。可能原因:
a.
比色皿在比色皿架中放置的位置不一致,或其表面有液滴。解决方法:用擦镜纸擦干净比色皿表面,然后将其安放在比色槽的左边,上面用定位夹定位。
b.
电路故障(电压、光电接收、放大电路)。解决方法:送修。
4
、数显不稳。可能原因:
a.
预热时间不够。解决方法:延长预热时间至
30
分钟左右(部分仪器由于老化等原因,长时间处于工作状态时,也会工作不稳)。
b.
光电管内的干燥剂失效,使微电流放大器受潮。解决方法:烘烤电路,并更换或烘烤干燥剂。
c.
环境振动过大、光源附近空气流速大、外界强光照射等。解决方法:改善工作环境。
d.
光电管、电路等其它原因。
已测试
232
次 平均
7
个工作日完成
100%
对测试结果满意
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